產品中心
PRODUCT CENTER
高效的FFPE和FNA DNA提取試劑盒
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
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AJ101 |
BcMag ? 一步法FFPE和FNA DNA純化試劑盒 |
50 preps |
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AJ102 |
BcMag ? 一步法FFPE和FNA DNA純化試劑盒 |
100 preps |
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組分 |
存儲條件 |
50 preps，貨號#AJ101 |
100 preps，貨號#AJ102 |
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BcMag? U-DNA Beads |
4°C |
2.5 ml |
5.0 ml |
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10x Lysis Buffer (100mM Tris-HCl, PH 9.0) |
4°C |
0.6 ml |
1.2 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
12.5 mg |
25 mg |
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DTT(1M) |
-20°C |
15.4 mg |
30.8 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
1.0 ml |
2.0 ml |
運輸和儲存：根據下表，在收到貨物時儲存各組分。
簡介
福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織和細針穿刺活檢（FNA）是病理學家使用的檔案組織樣本的流行來源。它可以在室溫下長期保存組織樣本，非常方便。因為這種組織保存方式是標準保存方法，所以它也是生物學研究材料的主要來源。分子腫瘤學診斷的關鍵步驟之一是獲得高質量的基因組DNA。FFPE或FNA衍生的DNA突變分析有助于診斷大多數實體瘤疾病。表皮生長因子受體（EGFR），Kristen Ras基因（KRAS），神經母細胞瘤Ras基因（NRAS）以及使用FFPE DNA進行顯著突變基因熱點檢測的，新一代測序等研究對于確定特定的癌癥治療至關重要。
然而，從這些組織中提取出 基因組DNA是一個艱難的挑戰，主要是由于福爾馬林的固定，會導致蛋白質和DNA之間的交聯以及不同的DNA交鏈。因此， DNA經常被廣泛破壞和片段化。碎裂程度取決于組織類型，樣品存放時間和特定的固定程序。這些特性可能會對下游應用產生影響，其中許多應用都需要使用PCR。因此，從FFPE組織中提取DNA必須成功提取出這些高度片段化的基因組DNA，并需要解決福爾馬林固定產生反向交聯。
為了提取足夠的基因組DNA（gDNA）進行下游分析，幾種市售的核酸提取試劑盒需要至少10μm的起始生物檢測材料。由于這些生物檢材都是從人類患者那里獲得的，因此提取試劑盒優劣至關重要，因為它規定了所需生物檢材的大小以及對每個FFPE塊進行的分析次數。而一些存儲的組織由于太小而無法滿足這種條件，因此這種限制就降低了可行應用的次數。此外，使用這些試劑盒進行DNA提取可能很耗時，“結合-洗滌-洗脫”過程也可能會導致大量DNA丟失。
BcMag ? 一步法FFPE＆FNA DNA純化試劑盒旨在從2μm-5μm福爾馬林固定，石蠟包埋（FFPE）組織或細針穿刺活檢樣品中有效且有序的提取出總核酸。該試劑盒使用我們獨特的磁珠，在水性緩沖液中有效去除FFPE組織樣品中的石蠟，同時對組織進行再裂解。該過程清除了易燃和有氣味的二甲苯或d-檸檬烯，以及從通常用于脫蠟的，且難以看到的組織顆粒中殘留的有機溶劑。此外，該試劑盒是獨特的，因為它的專有磁珠可以僅需一步從樣品中去除PCR抑制劑，而無需DNA提取過程。
圖1：細胞裂解物清除和PCR抑制劑去除
因此，它增加了核酸的回收率，避免了傳統DNA提取技術中，使用的耗時的“結合-洗滌-洗脫”過程引起的DNA損失。樣品裂解后，簡單的一步法純化技術非常適合同時處理>96個樣品，并在不到30分鐘內完成DNA純化。純化的基因組DNA具有極高的完整性，可用于各種下游應用，例如qPCR，突變篩選，微陣列分析，測序，Southern印跡和SNP分析。
一步法FFPE和FNA DNA分離的工作流程和結果
1.為了裂解樣品，向樣品中加入功能磁珠和蛋白酶K，并在65°C下孵育。
2.將樣品渦旋/吹吸，以便于磁珠以捕獲PCR抑制劑。
3、用磁力架將磁珠與樣品分離。
4. 吸出含有純凈DNA/RNA的上清液。
圖2：一步法FFPE和FNA DNA 純化的工作流程
特點和優勢：
? 快速有效的純化方案：無需事先進行DNA分離，即可用于直接工作流程，無需液體轉移和一管。
? 超快：在不到一小時內處理96個樣品。
? 最高的核酸回收率：提取過程中DNA的損失最小
? 有效去除抑制劑：多酚化合物、腐殖酸/富里酸、酸性多糖、單寧、黑色素、肝素、洗滌劑、牛仔布染料、二價陽離子如Ca2+、Mg2+等。
? 高度改進的活性石蠟去除方法：不需要二甲苯等有毒有機溶劑
? 成本效益：消除了色譜柱，過濾器，費力的重復移液和有機試劑。
? 高通量：與許多不同的自動化液體處理系統兼容。
